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Le Différenciateur Alcool-Acétone est une solution solvante équilibrée utilisée lors de l'étape la plus délicate de la coloration de Gram : la décoloration. Son rôle est de tester la perméabilité de la paroi bactérienne après le mordançage au Lugol. Sur les bactéries à Gram négatif, riches en lipides, le mélange dissout la membrane externe et laisse échapper le complexe violet-iode. En revanche, il déshydrate le peptidoglycane épais des bactéries à Gram positif, emprisonnant le colorant à l'intérieur. Ce mélange est préféré à l'alcool pur car l'ajout d'acétone accélère le processus, offrant une différenciation plus tranchée et un gain de temps considérable lors des analyses en série.
